Feinkartierung des Resistenzgens RPB1 von Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. gegen Plasmodiophora brassicae Wor. mit Hilfe molekularer Marker als Basis für eine kartengestützte Klonierung

Zielsetzung war die Grob- und Feinkartierung des Resistenzgens RPB1 mit phänotypischen und molekularen Markern sowie die Erstellung eines YAC-Contigs in dem Bereich des Resistenzgens RPB1 als Grundlage für eine kartengestützte Klonierung des Gens. Als Voraussetzung für die Kartierung wurden als erstes eindeutige und reproduzierbare Kriterien für die Bonitur der Resistenz in der Kartierungspopulation festgelegt. Mit Hilfe phänotypischer Marker konnte das Gen zunächst in einem 22 cM großen Intervall auf Chromosom 1 kartiert werden. Diese Grobkartierung ermöglichte es, aus den genetischen Karten von Arabidopsis thaliana gezielt weitere molekulare Marker (RFLP, SSLP) für die Feinkartierung des Gens auszuwählen. Gleichzeitig wurden RAPD Marker in der Nähe des Resistenzgens identifiziert, um bei den sehr arbeitsaufwendigen Resistenztests bereits frühzeitig Pflanzen der Kartierungspopulation mit Rekombinationsereignissen in der Nähe des Gens RPB1 identifizieren zu können. Auf der Basis von einer 550 Pflanzen umfassenden Kartierungspopulation erwiesen sich die RFLP-Marker m253 und AIG1 mit einem Abstand von 0,9 cM bzw. 2,4 cM als am engsten gekoppelte flankierende Marker, während der Marker rpHS-1 mit dem Resistenzgen kosegregierte. Durch Korrelierung der physikalischen Karte von Chromosom 1 mit den Kartierungsergebnissen konnte ein Contig identifiziert werden, das den Bereich zwischen den flankierenden Markern des Gens RPB1 umfaßte. Die experimentelle Überprüfung dieser Angaben führte zu der Erstellung eines neuen YAC-Contigs, das den Bereich um das Gen RPB1 umfaßt (Marker m253, rpHS-1).